期刊简介
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首页>实用癌症杂志
- 杂志名称：实用癌症杂志
- 主管单位：江西省卫生厅
- 主办单位：江西省肿瘤医院 江西省肿瘤研究所
- 国际刊号：1001-5930
- 国内刊号：36-1101/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 万方收录(中), 维普收录(中)
人热休克蛋白70的原核表达和纯化的实验研究
应敏刚；林绍峰；谢云青；郑秋红
关键词：热休克蛋白70, 基因重组, 原核表达, 纯化
摘要：目的 在大肠杆菌中表达人源性热休克蛋白70基因并纯化表达产物.方法 以人HSPO cDNA为模板,采用PCR方法进行扩增,将PCR产物克隆到表达载体pET30a上,将重组质粒pET30a-HSP70转化大肠杆菌B121上,经IPTG诱导后,表达产物进行SDS-PAGE及Western blot验证并纯化.结果 应用PCR方法扩增出约1 900 bp的目的片段;经酶切鉴定和DNA测序证实,HSP70基因成功地克隆到原核表达载体pET-30a上;转入重组质粒的大肠杆菌经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE,发现在分子量约为70 kD处有蛋白表达,Westem blot证实其为目的蛋白,纯化后的HSP70纯度达到90%以上.结论在大肠杆菌中已成功地表达了HSP70蛋白并且经过纯化,为研究HSP70的结构、功能及临床应用提供了必要条件.
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